VIEW ARTICLE    DOI: 10.1094/ASBCJ-58-0063

Monoclonal Antibodies Showing Surface Reactivity with Lactobacillus and Pediococcus Beer Spoilage Bacteria. Barry Ziola (1), Marcie Ulmer, Janice Bueckert, and Dawn Giesbrecht, Department of Microbiology and Immunology, University of Saskatchewan, Saskatoon, SK, Canada S7N 5E5; and S. Y. Lee, Brewing Research and Development, Coors Brewing Co., Golden, CO 80401-1295. (1) Corresponding author. Phone: 306-966-4330; Fax: 306-966-4311; E-mail: <ziola@sask.usask.ca> J. Am. Soc. Brew. Chem. 58(2):63-68, 2000. Accepted January 14, 2000.

Five monoclonal antibodies (Mabs) were isolated based upon reactivity with both a Lactobacillus and a Pediococcus beer spoilage isolate. Immunoblot analysis and Proteinase K treatment both suggested that none of the antigens recognized by the Mabs were proteins. Since the Mabs were known to bind surface-accessible antigenic sites on Gram-positive bacteria, it was proposed that lipoteichoic acid (LTA) was the antigen recognized. Each of the Mabs was purified and conjugated with horseradish peroxidase. Isolation of LTA, followed by direct antibody binding and antibody competition enzyme immunoassays, confirmed this. To determine whether the five Mabs were binding the same site on the LTA, the ability of each Mab to inhibit the binding of each of the enzyme-conjugated Mabs was determined. The data obtained allow us to propose that the five Mabs recognize three spatially distinct epitopes on the bacterial LTA. As the Mabs were found to bind to most beer spoilage Lactobacillus and Pediococcus isolates tested, these Mabs could prove useful in rapid detection of these Gram-positive beer-spoilage bacteria. Keywords: Epitope mapping, Lipoteichoic acid

Se aislaron cinco anticuerpos monoclonales (Mabs) en función de que reaccionaban tanto con una cepa de Lactobacillus como de Pediococcus, ambas capaces de deteriorar la cerveza. Tanto el análisis mediante técnicas de inmunotransferencia, como los tratamientos con Proteinasa K, sugirieron que ninguno de los antígenos reconocidos por los Mabs eran proteínas. Puesto que se conocía que los Mabs se unían a haptenos accesibles en la superficie de las bacterias Gram positivas, se postuló que el ácido lipoteicoico (LTA) era el antígeno reconocido. Cada uno de los Mabs se purificaron y conjugaron con la Peroxidasa de rábano. El aislamiento del LTA, seguido por experimentos de su reconocimiento directo por los anticuerpos, así como de inmunoensayos enzimáticos de competición por los anticuerpos, confirmaron la hipótesis anterior. Con objeto de determinar si los cinco Mabs reconocían el mismo lugar en el LTA, se determinó su capacidad de inhibición sobre la unión de cada uno de los Mabs conjugados con la Peroxidasa. Los resultados obtenidos nos permiten proponer que los cinco Mabs reconocen tres epítopos de distinta ubicación espacial en el LTA bacteriano. Dado que hemos encontrado que estos Mabs se unen a una gran mayoría de las cepas de Lactobacillus y Pediococcus sobre las que se han ensayado, dichos Mabs podrían resultar útiles en la detección rápida de estas bacterias Gram positivas capaces de deteriorar la cerveza. Palabras clave: Mapa de epítopos, Ácido lipoteicoico