VIEW ARTICLE doi:10.1094/ASBCJ-2010-0527-01
Development of a PCR Method for Detection of Saccharomyces cerevisiae in Brewery Rinse Water. Chris Powell (1), Lallemand Inc., Montreal, Canada, and University of Nottingham, School of Biosciences, Sutton Bonington Campus, Loughborough, UK; Annick Mercier, Lallemand Inc., Montreal, Canada; and Fred Strachan, Sierra Nevada Brewing Co., Chico, CA. (1) Corresponding author. E-mail: <chris.powell@nottingham.ac.uk>; Phone: +44 (0) 115 951 6191. J. Am. Soc. Brew. Chem. 68(3):148-151, 2010.
A rapid quantitative PCR (qPCR)-based method for the detection of ale yeast (Saccharomyces cerevisiae) in rinse water was developed as a means of assessing vessel hygiene. Yeast cells were collected from spiked samples using a novel hollow-fiber filtration unit (ElutraSep module) that allows cell recovery by elution in a small final volume. The efficiency of the filtration device was determined by analysis of the growth of recovered cells on solid medium and compared with standard membrane filtration. In conjunction, cells were detected using qPCR with primers specific to S. cerevisiae. The presence of yeast was indicated by DNA amplification (cycle threshold value) and confirmed by melting-point analysis. DNA could be identified in samples containing between 5 × 10(^2) and 5 × 10(^3) total cells. Given that volumes of up to 15 L can be filtered through the ElutraSep device, this corresponds to a potential detection limit of less than 1 cell in 3 mL of rinse water. The method described here allows the detection and quantification of yeast in rinse-water samples within a period of 2–4 hr, without the need for preenrichment. Consequently, a rapid evaluation of yeast vessel hygiene can be achieved, leading to potentially faster response times. Keywords: CIP, ElutraSep, Hygiene, Membrane filtration, Yeast
Una rápida PCR cuantitativa (qPCR)-basado en el método para la detección
de levaduras ale (Saccharomyces cerevisiae) en muestras de agua de
enjuague se desarrolló como un medio para medir la higiene buque. Las células de
levadura se obtuvieron de muestras inoculadas con una unidad de la novela de
fibra hueca de filtración (módulo ElutraSep) que permite la recuperación de
células por elución en un volumen final pequeñas. La eficacia del dispositivo de
filtración de fibra hueca se determinó mediante el análisis del crecimiento de
las células recuperadas en medio sólido y en comparación con la filtración de
membrana estándar. En conjunto, las células fueron detectadas mediante qPCR con
cebadores específicos de S. cerevisiae. La presencia de la levadura se
indicó por la amplificación de ADN (valor umbral de ciclo) y confirmado por el
deshielo de análisis de punto. ADN se pudo identificar en las muestras que
contienen entre 5 × 10(^2) y 5 × 10(^3) células totales. Dado que los volúmenes
de hasta 15 L se puede filtrar a través del dispositivo de filtración de fibra
hueca, esto corresponde a un límite de detección potencial de menos de 1 celular
en 3 mL de agua de enjuague. El método descrito aquí permite la detección y
cuantificación de levaduras en muestras de agua de enjuague en un plazo de 2–4
hr, sin necesidad de pre-enriquecimiento. En consecuencia, una rápida evaluación
de la higiene de levadura buque se puede lograr, lo que potencialmente los
tiempos de respuesta más rápido. Palabras claves: CIP, ElutraSep, Filtración de
membrana, Higiene, Levadura