VIEW ARTICLE    DOI: 10.1094/ASBCJ-54-0019

Studies on the Activation and Release of Bound Limit Dextrinase in Malted Barley. Michael J. Sissons (1), BRF International, Lyttel Hall, Coopers Hill Road, Nutfield, Surrey, U.K. RH1 4HY. (1) Present address: CSIRO Division of Plant Industry, Canberra, ACT, 2601, Australia. J. Am. Soc. Brew. Chem. 54(1):19-25. Accepted June 27, 1995.

Free and bound forms of limit dextrinase (LD) (EC 3.2.1.41) in malted barley (Hordeum vulgare L.) were studied. A soluble extract of malt contains two forms of LD, a free (active) and a latent or soluble bound (inactive) form. Conversion of the bound to the free form in vitro can be achieved using reducing agents or the proteolytic enzyme papain. Malt contains approximately 20% free and 70% soluble bound LD, with the remainder bound to the insoluble grist fraction. Soluble bound enzyme was released by papain but not by dithiothreitol (DTT) after endogenous proteases had been inactivated by heating, consistent with release of bound enzyme by a proteolytic mechanism. However, inhibition of the release of soluble bound LD by leupeptin (a specific sulfhydryl protease inhibitor) was partly reversed by heating to 40°C in the presence of DTT or papain, indicating that the mechanism of release is not simply via protease activation. Release of soluble bound enzyme varies with the period of extraction and temperature. The ratio of free to bound enzyme varies between malts prepared from different cultivars, but the majority of the enzyme in four- to five-day malts is bound. Gibberellic acid increases the proportion of free enzyme during malting but only when used at levels much higher than those used commercially. Keywords: Activation, Barley, Limit dextrinase, Malt, Protease.

Las formas libre y asociada de la dextrinasa limitante (LD) (EC 3.2.1.41) en cebada malteada (Hordeum vulgare L.) fueron estudiadas. Un extracto soluble de malta contiene dos formas de LD, una libre (activa) y otra latente o forma soluble asociada (inactiva). Conversión de la forma asociada a la libre, in vitro, puede realizarse usando agentes reductores o la enzima proteolitica papáina. La malta contiene aproximadamente 20% de la LD libre y 70% de la LD soluble asociada y el resto unido a la fracción insoluble. La forma soluble asociada fue liberada por papáina pero no por et ditiotreitol (DTT) después que las proteasas endógenas habían sido inactivadas por calentamiento, este hecho consistente con la liberacion de la enzima asociada por un mecanismo proteolítico. Sin embargo, la inhibición de la liberación de la LD soluble asociada por la leupeptina (un inhibidor específico de la sinlfhidril proteasa) fue parcialmente revertida por calentamiento a 40°C en presencia de DTT o papaina, indicando esto que el mecanismo de liberación no es simplemente por activación de proteasa. La liberación de la enzima soluble asociada varía con el período de extracción y con la temperatura. La relación libre/asociada de la enzima varía entre maltas provenientes de diferentes cultivos, pero la mayoría de la enzima en maltas de 4-5 días es asociada. El ácido giberélico incrementa la proporción de enzima libre durante el malteo, pero únicamente cuando se usa a niveles mucho más altos que los que se usan comercialmente.